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    專性厭氧菌的培養(yǎng)方法及注意事項

    更新時間:2024-07-31   點擊次數(shù):552次

     一、專性厭氧菌的介紹

      根據(jù)細菌生長對氧的需求,主要可分為四大類:專性需氧菌、兼性厭氧菌、專性厭氧菌、微需氧菌。

      專性厭氧菌需要在嚴格無氧的氣體環(huán)境中生長,氧氣會對菌產(chǎn)生毒害作用,也有一些厭氧菌在含5%-10%二氧化碳氣體環(huán)境中可耐受低濃度的氧氣。常見的專性厭氧菌有梭菌屬(如產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、破傷風(fēng)梭菌、艱難梭菌等)、雙歧桿菌屬(如嬰兒雙歧桿菌、動物雙歧桿菌等)、擬桿菌屬、梭桿菌屬、厭氧消化鏈球菌屬等。


    二、厭氧培養(yǎng)環(huán)境的構(gòu)造

      (1)使用厭氧培養(yǎng)箱,通氣培養(yǎng)。一些厭氧培養(yǎng)箱可同時進行接種等微生物操作,并直接進行培養(yǎng),操作方便,成功率高,缺點是多數(shù)實驗室不具備,損耗較大,對于小規(guī)模的培養(yǎng)試驗來說,成本較高。

      (2)使用厭氧罐、厭氧盒或厭氧培養(yǎng)袋+厭氧產(chǎn)氣包,可制作小型或中型空間的厭氧環(huán)境,操作方便,不需要任何復(fù)雜的專門設(shè)備,可在所有實驗室中使用,非常適合實驗室中小規(guī)模的試驗操作。

    注意事項:培養(yǎng)基必須與厭氧環(huán)境氣體流通,如使用試管、錐形瓶等容器培養(yǎng),必須確保塞子透氣;培養(yǎng)平皿時,必須保證平皿的透氣性良好,不能使用封口膜密閉纏繞。

      厭氧產(chǎn)氣包的介紹 點擊查看

      (3)液體培養(yǎng)基可采用覆蓋石蠟隔絕氧氣的方法,如皰肉培養(yǎng)基、梭菌增菌培養(yǎng)基等,在培養(yǎng)基配制完成分裝后,在培養(yǎng)基上方覆蓋約0.5-1cm厚度的液體石蠟,再進行滅菌處理,可直接進行厭氧菌的培養(yǎng),無需使用厭氧培養(yǎng)箱或厭氧罐等設(shè)備。

      注:在滅菌前覆蓋石蠟,滅菌過程中培養(yǎng)基中溶解的氧氣會逸出,冷卻后石蠟會阻隔空氣中氧氣的進入,可以更好的制造厭氧環(huán)境;培養(yǎng)基中也可補加一定量的還原性鐵粉或硫乙醇酸鈉、半胱氨酸等還原性成分,幫助維持厭氧環(huán)境。

      (4)有些培養(yǎng)基可自然的形成厭氧環(huán)境,無需厭氧培養(yǎng),如硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基,靜置過程會自發(fā)分層,下層為無氧環(huán)境,無需任何厭氧設(shè)備,也無需覆蓋液體石蠟,即可培養(yǎng)厭氧菌。


    三、常見厭氧菌的培養(yǎng)基

    1.硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基

      此培養(yǎng)基常用于梭菌的活化及增菌培養(yǎng),也可對營養(yǎng)成分進行改良用于一些營養(yǎng)要求較高的厭氧菌的培養(yǎng),此培養(yǎng)基可自然的形成厭氧環(huán)境,無需厭氧培養(yǎng),此培養(yǎng)基靜置過程會自發(fā)分層,下層為無氧環(huán)境,無需任何厭氧設(shè)備,也無需覆蓋液體石蠟,即可培養(yǎng)厭氧菌。

      硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基介紹 點擊查看

    2.皰肉培養(yǎng)基

      相比較于硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基,此培養(yǎng)基需覆蓋液體石蠟,用于培養(yǎng)梭菌時,可以存活更長時間(如生孢梭菌,在硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中只能存活數(shù)天,而在皰肉培養(yǎng)基中可存活數(shù)月以上)。

      皰肉培養(yǎng)基基礎(chǔ)介紹 點擊查看

    3.GAM/改良GAM培養(yǎng)基

      此培養(yǎng)基營養(yǎng)非常豐富,適用于絕大多數(shù)的厭氧菌培養(yǎng),特別是用于比較難培養(yǎng)的營養(yǎng)苛求型細菌(如擬桿菌屬)。

      GAM培養(yǎng)基介紹 點擊查看

    4.血平板/CDC厭氧菌瓊脂

      營養(yǎng)豐富,適用于絕大多數(shù)厭氧菌的培養(yǎng)(梭菌、擬桿菌等均可培養(yǎng))。

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    5.MRS瓊脂/肉湯

      用于雙歧桿菌的培養(yǎng),制備好的MRS肉湯培養(yǎng)基澄清透明無沉淀,常用于乳酸菌或雙歧桿菌的活化、增菌及收集菌體。

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      MRS肉湯介紹 點擊查看


    四、注意事項

      (1)培養(yǎng)基的制備

      需覆蓋石蠟的液體培養(yǎng)基,應(yīng)在滅菌前完成分裝并覆蓋液體石蠟;流體培養(yǎng)基或半固體培養(yǎng)基在有氧條件下培養(yǎng)厭氧菌時,使用前可采用沸水浴或其他除氧方式排出培養(yǎng)基內(nèi)溶解的氧氣.

      (2)操作過程

      因氧氣會對厭氧菌產(chǎn)生毒害作用,因此整個操作過程應(yīng)在專門的無氧設(shè)備中進行。如在正常空氣中操作,從厭氧菌暴露在空氣中開始到放入?yún)捬醐h(huán)境中培養(yǎng)結(jié)束,整個過程應(yīng)盡可能快速操作,一般不超過15分鐘,暴露時間越長,厭氧菌越容易死亡。

      (3)培養(yǎng)環(huán)境

      可采用厭氧罐、厭氧培養(yǎng)箱、厭氧產(chǎn)氣包等方式提供厭氧環(huán)境,除了確保氣體環(huán)境無氧之外,有些厭氧菌通常還需要5%-10%的二氧化碳、氫氣等氣體促進生長并提高厭氧菌對氧氣的耐受性,更容易培養(yǎng)成功。


    注:本文屬海博生物原創(chuàng),未經(jīng)允許不得轉(zhuǎn)載。


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